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产品描述
有效活菌数:
生物炭:
有机质:
黄腐酸:
腐植酸:
产品描述
Taq DNA Polymerase是嗜热性Thermus aquaticus表达的热稳定重组型DNA聚合酶,分子量为94 kDa。具有5’→3’聚合酶活性和5’→3’外切酶活性,无3’→5’外切酶活性。扩增产物具有3′-dA,可直接用于TA克隆。
规格:5 U/µL。
运输与保存方法
冰袋运输。产品-20℃保存。有效期2年。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,74ºC,30 min内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。
质量控制
核酸外切酶残留检测:20 μL反应体系,10U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ,74ºC下孵育1 h,DNA的电泳谱带无变化。
核酸内切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA,74ºC下孵育1 h,DNA的电泳谱带无变化。
大肠杆菌残留DNA检测:50 μL体系中,加入2 U本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。
注意事项
1、为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
PCR反应体系(冰上配制)
组分 | 体积(μL) | 终浓度 |
ddH2O | to 50 | - |
10×Taq Buffer(Mg2+ Free) | 5 | 1× |
25 mM MgCl2 | 3 | 1.5 mM |
dNTP Mix (10 mM each) | 1 μL | 0.2 mM |
模板DNA | optional | - |
引物1(10 μM) | 2 μL | 0.4 μM |
引物2(10 μM) | 2 μL | 0.4 μM |
Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.4 μL | 0.04 U/μL |
PCR扩增程序
循环步骤 | 温度(ºC) | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94 | 30 s~5 min | 1 |
变性 | 94 | 30 s | 35 |
退火 | 50~60 | 30 s | |
延伸 | 72 | 60 s/kb | |
终延伸 | 72 | 10 min | 1 |
1.预变性温度和时间:推荐使用94ºC。预变性推荐时间:质粒DNA等简单模板为30 s;cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min;高GC含量模板为5~10 min。
2.退火温度和时间:推荐使用60ºC,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 s,可以在10~30 s内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3.扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20ºC保存,防止DNA发生降解。
上一个
Tth DNA聚合酶
下一个
无