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Taq DNA聚合酶

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产品编号
所属分类
分子生物酶
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  • 1
    产品描述
    有效活菌数:
    生物炭:
    有机质:
    黄腐酸:
    腐植酸:
    产品描述
    Taq DNA Polymerase是嗜热性Thermus aquaticus表达的热稳定重组型DNA聚合酶,分子量为94 kDa。具有5’→3’聚合酶活性和5’→3’外切酶活性,无3’→5’外切酶活性。扩增产物具有3′-dA,可直接用于TA克隆。
    规格:5 U/µL。
    运输与保存方法
    冰袋运输。产品-20℃保存。有效期2年。
    活性定义
    用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,74ºC,30 min内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。
    质量控制
    核酸外切酶残留检测:20 μL反应体系,10U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ,74ºC下孵育1 h,DNA的电泳谱带无变化。
    核酸内切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA,74ºC下孵育1 h,DNA的电泳谱带无变化。
    大肠杆菌残留DNA检测:50 μL体系中,加入2 U本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。
    注意事项
    1、为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
    PCR反应体系(冰上配制)
    组分 体积(μL 终浓度
    ddH2O to 50 -
    10×Taq Buffer(Mg2+ Free) 5
    25 mM MgCl2 3 1.5 mM
    dNTP Mix (10 mM each) 1 μL 0.2 mM
    模板DNA optional -
    引物1(10 μM) 2 μL 0.4 μM
    引物2(10 μM) 2 μL 0.4 μM
    Taq DNA Polymerase (5 U/μL) 0.4 μL 0.04 U/μL
    PCR扩增程序
    循环步骤 温度(ºC 时间 循环数
    预变性 94 30 s~5 min 1
    变性 94 30 s 35
    退火 50~60 30 s
    延伸 72 60 s/kb
    终延伸 72 10 min 1
    1.预变性温度和时间:推荐使用94ºC。预变性推荐时间:质粒DNA等简单模板为30 s;cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min;高GC含量模板为5~10 min。
    2.退火温度和时间:推荐使用60ºC,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 s,可以在10~30 s内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
    3.扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20ºC保存,防止DNA发生降解。
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