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产品描述
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产品描述
Alkaline Phosphatase，中文名碱性磷酸酶，可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除，常用于阻止载体的自连作用：在分子克隆实验中，DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’端无磷酸基团，因而不可以和自身3’端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止，提高了目的片段插入率。另外，碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板，以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。
本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶，可以降解几乎所有磷酸单酯，但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。
来源：重组大肠杆菌（小牛肠ALP基因）。
规格：30 U/µL。
应用
1.克隆载体DNA的脱磷酸化，以防止连接过程中的再循环；
2.在PCR产物测序之前的dNTPS降解；
3.在用T4多核苷酸激酶标记前，核酸5'-端的脱磷酸化；
4.其他DNA和RNA底物去磷酸化的应用。
运输与保存方法
冰袋运输。产品-20°C保存。
活性定义
在37°C，pH9.8条件下，以对硝基苯酚磷酸盐为底物，1min生成1 µmol硝基酚所用的碱性磷酸酶量定义为1个活性单位(U)。
失活
在螯合剂存在下，65°C加热30min，99%活性不可逆丧失；使用苯酚，可使酶完全失活。
质量检测
无内切或外切核糖核酸酶、核糖核酸酶污染。
储存缓冲液
100 mM Tris-HCl（pH 8.0），1 mM MgCl2，0.1 mM ZnCl2，0.1% (v/v) Triton X-100和50% (v/v) 甘油。
10 X ALP Buffer
1 M Tris-HCl (pH 8.0，37°C)，100 mM MgCl2，0.1 mM ZnCl2，100 mM KCl。
最佳pH
该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH为10；在底物浓度低时，最佳pH为8。
注意事项
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
