您好，欢迎来到潍坊华诺生物科技有限公司官方网站！
销售热线：400-168-2116
浏览量:
1000
产品描述
有效活菌数:
生物炭:
有机质:
黄腐酸:
腐植酸:
产品描述
热敏UDG酶可通过催化水解含有U-DNA位点DNA链的尿嘧啶糖苷键 (碱基切除)，释放尿嘧啶并产生碱敏感的无嘧啶基位点 (AP-DNA)，该酶可作用于含尿嘧啶的单链和双链DNA。
热敏UDG酶对双链DNA的活性低于单链DNA。该酶对小的U-DNA寡核苷酸和dUMP有活性，但对RNA或正常的无尿嘧啶DNA无活性。由于热敏UDG酶无金属离子要求，所以该酶在Mg2+或EDTA的存在下是有活性的。
规格：1 U/µL。
产品应用
1、在已经掺入脱氧尿苷酸残基位点切割DNA。通过碱处理，高温或内切核酸酶（如T4核酸内切酶）特异性切割无嘧啶位点，可催化水解产生的AP-DNA；
2、含尿嘧啶的DNA（U-DNA）可以用体外方法制备。可以使用热敏UDG酶实现位点特异性，链特异性或普通切割，这取决于如何制备U-DNA；
3、该酶可用于提高定向诱变方法的效率和用来获得高度标记的寡核苷酸探针；
4、热敏UDG酶可与dUTP一起使用，以消除DNA合成反应的PCR污染。为了使PCR产物易于降解，在 PCR反应混合物中，必须用dUTP替换dTTP。在PCR之前，PCR反应混合物必须用热敏UDG酶进行预处理，以降解含尿嘧啶的DNA。天然DNA不含尿嘧啶，因此样品不会因此而降解。
运输与保存方法
冰袋运输。产品-20℃保存。
活性定义
在37°C，60 min内完全降解1 μg 纯化的单链尿嘧啶DNA所需的热敏UDG酶的量定义为1个活性单位(U)。
质量检测
核酸内外切酶残留检测：10U的本酶和0.6 μg λ DNA-Hind III酶切产物37℃下孵育16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测：10U的本酶和1 μg HeLa细胞总RNA在37℃下孵育1小时，RNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌DNA残留检测：10U本品经E.coli 16s rDNA特异性的TaqMan qPCR检测，E.coli基因组残留低于10拷贝。
酶失活检测：10U本品经94℃处理2min，与1μg含dU的dsDNA模板温育30min，DNA的电泳谱带不发生变化。
操作手册
1、PCR反应体系（50 μL）：
| 试剂 | 加样量 |
| 10×PCR Buffer (Mg2+Plus) | 5μL |
| 25 mM MgCl2 | 3μL |
| dATP | 0.2 mM |
| dGTP | 0.2 mM |
| dCTP | 0.2 mM |
| dUTP | 0.8 mM |
| 引物1（10 μM） | 2μL |
| 引物2（10 μM） | 2μL |
| Taq DNA Polymerase（5 U/μL） | 0.5μL |
| Heat-Labile UDG（1 U/μL） | 1μL |
| ddH2O | up to 50 μL |
2、PCR反应设置：
| 反应温度 | 反应时间 |
| 15～25℃ | 10 min |
| 94℃ | 2min |
| PCR反应程序 |
注：热失活：95°C加热2min。（若用于RT-PCR，55°C加热10min进行热失活。）
注意事项
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
上一个
RNase抑制剂
下一个
Taq DNA连接酶
