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产品描述
有效活菌数:
生物炭:
有机质:
黄腐酸:
腐植酸:
产品描述
T4 DNA连接酶催化双链DNA或RNA上相邻的5′-磷酸末端和3′-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平齐末端或粘性末端之间的连接，还可以修复双链DNA，RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切割。可用于高效连接粘性末端和平末端，T/A 克隆，dsDNA切刻修复，构建高丰度克隆文库，RNA和DNA的连接。
规格：600U/µL。
运输与保存方法
冰袋运输。产品-20°C保存。有效期2年。
活性定义
23°C 条件下，在50 μL 1×DNA连接酶缓冲液中，孵育30 min后，连接50% 100ng具有粘性末端的DNA片段所需的酶用量定义为1个活性单位(U)。
质量控制
核酸外切酶残留检测：在含有放射性标记的 DNA底物和 10 μL 酶溶液的 50 μL 反应物中，37°C 下孵育4h， DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：在含有 0.5 μg 质粒DNA和10 μL酶溶液的50 μL反应中，37°C 温育4 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA残留检测：使用5μL变性酶溶液的重复样品进行评价，并使用对应于16S rRNA 基因座的寡核苷酸引物在 TaqMan qPCR 测定中筛选污染性大肠杆菌基因组DNA的存在。
操作流程
1.反应体系:
| 试剂 | 20 μL 反应体系 |
| 载体 DNA | 20～100 ng |
| 插入 DNA | 与载体 DNA 摩尔比 3:1 |
| 10× T4 DNA Ligase Buffer | 2 μL |
| T4 DNA Ligase | 1μL |
| ddH2O | Up to 20 μL |
2.轻轻混合反应液。
3.对于粘性末端，16°C 过夜或者室温孵育10 min；对于平末端，16°C过夜或者室温孵育2h；高浓度快速连接酶可以用于10 min的连接反应。
4.在冰上转移 1～5 μL反应液至50 μL感受态细胞。
注意事项
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
